Provavelmente
Não temos nenhum exemplo canônico para provar definitivamente de qualquer forma. Não há indicação, no entanto, de que os participantes tenham que ser mágicos. Você faz precisa de pelo menos uma varinha para fazer o feitiço funcionar.
“Certainly, Narcissa, I shall make the Unbreakable Vow,” he said quietly. “Perhaps your sister will consent to be our Bonder.”
Bellatrix’s mouth fell open. Snape lowered himself so that he was kneeling opposite Narcissa. Beneath Bellatrix’s astonished gaze, they grasped right hands.
“You will need your wand, Bellatrix,” said Snape coldly.
(Half-Blood Prince, Chapter 2, Spinner's End).
Então o Bonder tem que ser um bruxo ou bruxo, e precisa de uma varinha para realizar o feitiço. Não vejo razão para que os outros dois partidos precisem ser bruxos ou bruxas.
Dado que pessoas mágicas são proibidas de revelar sua magia (que certamente incluiria o Voto Inquebrantável) aos trouxas pelo Estatuto de Sigilo, é improvável que essa situação se apresente. No entanto, se um mago quiser usar o feitiço com um trouxa, não vejo razão para não funcionar.